包膜氯化胆碱在人工体外模拟奶牛瘤胃、皱胃、小肠中溶出、释放、吸收的效果评价

氯化胆碱属于维生素类，其主要生理功能具有维持细胞结构完整性,保证细胞膜通透性和生物信号传导等方面发挥关键作用。

 

胆碱也是构成磷脂的重要成分,参与骨骼和软骨基质的成熟过程；参与动物体内脂肪代谢，脂肪在肝脏被降解成脂肪酸和甘油,胆碱可以将脂肪酸与卵磷脂结合后转运出肝脏,避免脂肪在肝脏的大量沉积，可缓解脂肪肝的形成。

胆碱作为甲基供体参与蛋氨酸的合成，因而可节省体内蛋氨酸中甲基团的消耗，并在形成醋酸脂乙酸胆碱的情况下参与传导神经冲动。

 

 

在奶牛特殊的的围产期间，奶牛需要更多的胆碱来帮助肝脏处理多余的脂肪，让甘油三酯能顺利转移出肝脏。

其意义在于减少肝脏脂肪的沉积和酮体的生成，能有效减少脂肪酸和酮体对组织和器官的损伤，使奶牛从泌乳期的开端到更高的峰值产奶量阶段有一个平稳的过渡，缓解机体糖-脂代谢紊乱，减少多种代谢性疾病的发生，如脂肪肝、酮病、继发性疾病等，间接提高奶牛寿命和牧场经济效益。

 

 

目前市场上出售的氯化胆碱产品剂型主要有液体状、粉状和包膜状。现主要针对包膜氯化胆碱在奶牛围产期中的应用效果，设计包膜氯化胆碱人工体外模拟奶牛瘤胃、皱胃、小肠中的溶出、释放、吸收分布情况的试验。

 

1.试验方案：取市售粉状50%氯化胆碱（20210612）和50%包膜氯化胆碱（耀飞公司自产，20210628），分别进行人工体外模拟奶牛瘤胃溶出度、皱胃释放率、小肠中的吸收分布情况。

 

2.试验材料：50%氯化胆碱（硅型）、50%包膜氯化胆碱（奥特碱）、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化钾、稀盐酸溶液、氢氧化钠溶液、甲基红一亚甲基蓝混合指示液、雷氏盐甲醇溶液、磷酸氢二钾、蛋白酶、胰脂肪酶、淀粉酶、玻璃砂芯坩埚、分析天平、电热干燥箱、SHZ-82水浴恒温振荡器、超声清洗器、电炉、真空泵、烧杯、滴定管、纯化水等一般试验室试剂和仪器。

甲基红一次甲基蓝混合指示液

 

3.试验方法

3.1 瘤胃溶出率：准确称取对照组粉剂氯化胆碱和试验组包膜氯化胆碱各9份，每份2.5g，分别浸入50ml人工瘤胃液中（McDougall缓冲液），McDougall缓冲液：将7.43克碳酸氢钠、7.00克磷酸二钠12水合物、0.34克氯化钠、0.43克氯化钾、0.10克氯化镁6水合物和0.05克氯化钙溶解在1000毫升水。于39℃恒温并摇晃2、4、6、8、10、12、16、20、24小时，分别分离过滤，测定滤液中胆碱含量与总量的比率。（过瘤胃保护率=100%-溶出率）

 

3.2 皱胃释放率：准确称取对照组粉剂氯化胆碱和试验组包膜氯化胆碱各5份，每份2.5g，分别浸入50ml皱胃液相对的Clark-Lubs缓冲液中，Clark-Lubs缓冲液：将3.73克氯化钾和2.1毫升盐酸溶解在1000毫升水中而制成的溶液。然后于39℃恒温摇晃2、4、6、8、10小时，分别分离过滤，测定滤液中胆碱含量与总量的比例。
 

3.3 小肠释吸收率：准确称取包膜胆碱5份各2.5g分别浸入小肠液相对的人工肠液（ph6.8）中，人工肠液：将6.8g磷酸氢二钾溶解于500ml水中，加入0.25g胰蛋白酶、9.375g胰脂肪酶、83.3mg胰淀粉酶，并定容至1000ml，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节ph为6.8。然后于39℃恒温摇晃2、4、6、8、10小时后，分别过滤，测定滤液中胆碱含量与总量的比例。

 

3.4 氯化胆碱含量测定方法：精密量取续滤液10ml，置100ml高型烧杯中，加3ml氢氧化钠溶液，盖上表面皿，在电炉上加热微沸5 min，冷却，用水冲洗表面皿及烧杯壁。加1滴甲基红一亚甲基蓝混合指示液，用盐酸溶液调至紫红色(pH5-pH6)，于冰水浴中冷却至5℃以下，继续保持在冰水浴中，在搅拌下，缓慢滴加15 ml雷氏盐甲醇溶液，继续搅拌反应30 min，再静置陈化30 min。将沉淀转移到预先已于(105士2)℃下干燥至质量恒定的玻璃砂芯坩埚中，减压抽滤、用水洗涤沉淀3~4次，每次用水约10ml。将装有沉淀的玻璃砂芯坩埚移人(105士2)℃电热千燥箱内，干燥2h，取出。于干燥器内冷却至室温，称量。在测定的同时，按测定相同的步骤，对不加实验室样品而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。结果计算：

 

W1-W0

X%=—————×5×0.33045×100

M×N

式中：
W１--- 沉淀质量的数值，单位为克(g);
W0--- 空白试验沉淀质量的数值，单位为克(g);

M--- 试料质量的数值，单位为克(g);

0.33045---氯化胆碱摩尔质量与雷氏盐-氯化胆碱沉淀产物摩尔质量的比值

5--试料的稀释倍数
N---包膜氯化胆碱的标示含量

 

4.试验结果及评价：

根据检测结果，普通氯化胆碱在瘤胃液中已完全溶出，活性成分已降解，不能到皱胃、小肠部位。而经过嵌入式包被工艺的包膜氯化胆碱(奥特碱），在本试验条件下的过瘤胃保护率大于90%、皱胃液中释放率小于10%，在小肠部位的吸收率大于97%。从而确保足量胆碱的活性成分在肠道中充分吸收利用。

 

5.试验小结：包膜氯化胆碱，可以减少脂肪肝，降低奶牛酮病的发生。促进NEFT的完全氧化，抑制酮体生成；降低血液中的β-羟基丁酸含量，从而减少甘油三酯沉积和脂肪肝，减少奶牛酮病发生。可以提高奶牛产奶品质，延长产奶高峰，促进NEFT转化为ATP，发挥产能作用，抑制能量负平衡的影响，增加泌乳能力。还可以提高乳脂、乳蛋白，减少蛋氨酸转化为胆碱的消耗，从而更多用于乳蛋白的合成。


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